第三代试管D3活检是指卵裂球活检，即受精卵发育成为6-8个细胞时进行的卵裂胚胎活检，又称为D3活检。在卵裂球阶段，胚胎经历了多个重要事件，包括配子基因组激活、胚胎极性相关蛋白的表达、致密性的发生、粘附分子的表达以及细胞间信号传导的建立等。进行卵裂球期活检可能存在一定的潜在风险，如可能导致后代表观遗传的改变。

    第三天活检(D3)可能带来的不良影响包括卵巢功能异常、表观遗传修饰异常、神经退行性病变、胚胎各发育节点时间的延长、胚胎着床率的降低以及妊娠期母体和胎儿的类固醇代谢异常。基于timelapse技术的研究显示，卵裂球期胚胎活检会延迟胚胎的后续发育和囊胚形成。活检时间对胚胎的着床能力产生影响：研究结果表明，卵裂球期活检的胚胎着床能力较未活检的胚胎下降39%；而对于囊胚期活检，研究显示胚胎的着床能力差异不大。